P2Y1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401759

概要

P2RY1はヒトP2Y1受容体をコードする遺伝子であり、主に細胞外ADPによって活性化されるGタンパク質共役型のプリン作動性受容体です。P2Y1はGq/PLCβシグナル伝達を開始し、IP3介在性のCa2+動員や、その下流にあるPKC/MAPK経路応答を誘導します。P2Y1はヌクレオチドの感知を介して、血小板の活性化・凝集、血管トーンの調節、ならびに内皮および免疫関連の文脈における細胞間コミュニケーションの制御に寄与します。神経系では、P2Y1シグナルがグリア活性やシナプスネットワークのダイナミクスを調節し、プリン作動性のシグナルを炎症過程や神経修飾過程に結び付け得ます。P2RY1活性の破綻（ディスレギュレーション）は血栓形成や心血管系の表現型と関連付けられており、細胞外ヌクレオチドが細胞挙動を規定する神経炎症や腫瘍微小環境シグナルの広い文脈でも研究されています。

P2Y1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるP2RY1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、P2RY1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、P2RY1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P2Y1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P2Y1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、P2RY1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P2Y1の機能に不可欠なP2RY1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、P2RY1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P2Y1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびP2Y1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、P2RY1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P2Y1 HDRプラスミド（h）および P2Y1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはP2RY1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のP2RY1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。