P23 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402670-ACT

O PTGES3 humano codifica a p23, uma co-chaperona conservada da HSP90 que estabiliza complexos de proteínas “cliente” e modula o ciclo de ATPase para apoiar a maturação proteica e a transdução de sinais. A p23 é mais conhecida por regular a montagem de receptores de hormônios esteroides e a sinalização nuclear, e também participa de redes mais amplas de proteostase que influenciam as respostas celulares ao estresse e o controle transcricional. Por meio de sua integração com vias dependentes de chaperonas, o PTGES3 pode afetar a proliferação celular, a diferenciação e respostas adaptativas ao estresse proteotóxico. Alterações no equilíbrio entre chaperonas e co-chaperonas e a desregulação da sinalização por receptores têm sido associadas a fenótipos relevantes para doenças, incluindo contextos de biologia do câncer e sinalização inflamatória, tornando o PTGES3 um nó útil para estudos mecanísticos.

P23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTGES3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

P23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTGES3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTGES3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de P23. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTGES3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de P23 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via P23 em células tumorais com expressão de PTGES3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.