Plasmide CRISPR/Cas9 KO p22HBP (m): sc-420826

Présentation

Le gène murin *Hebp1* code p22HBP, une protéine de liaison à l’hème impliquée dans le transport intracellulaire de l’hème et la régulation rédox dépendante de l’hème. p22HBP a été associée à des processus liés aux mitochondries, aux réponses au stress oxydatif et à la modulation de l’apoptose, ce qui concorde avec un rôle dans le maintien de l’homéostasie cellulaire en situation de stress métabolique. Par ses interactions avec l’hème et la signalisation dérivée de l’hème, *Hebp1* pourrait influencer des voies liées à l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène, à la fonction mitochondriale et au contrôle de la qualité des protéines. La dérégulation de la gestion de l’hème et les lésions oxydatives sont pertinentes dans la neurodégénérescence et les dommages tissulaires inflammatoires, ce qui fait de *Hebp1* une cible utile pour des études mécanistiques dans ces contextes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p22HBP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hebp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hebp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hebp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p22HBP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hebp1 pour l'étude de la signalisation de p22HBP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hebp1 essentiels à la fonction de p22HBP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hebp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p22HBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le p22HBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hebp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p22HBP plasmide HDR (m) et le p22HBP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hebp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hebp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.