p21-ARC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403677-ACT

ARPC3 codifica a p21-ARC, uma subunidade essencial do complexo Arp2/3, que nucleia redes ramificadas de filamentos de actina para impulsionar a formação de lamelipódios, a protrusão da membrana e a geração de força durante a migração celular. Por meio de regulação coordenada por GTPases da família Rho e por fatores promotores de nucleação, como as famílias WAVE e WASP, a p21-ARC sustenta processos dependentes de actina, incluindo endocitose, fagocitose, tráfego vesicular e organização da sinapse imunológica. A perturbação da remodelação do citoesqueleto mediada por Arp2/3 influencia a morfogênese epitelial, o crescimento neuronal e a motilidade de leucócitos, ligando a atividade de ARPC3 a mecanismos comumente explorados na biologia de invasão e metástase. Como regulador central da actina, ARPC3 é frequentemente estudado em vias que controlam a forma celular, a renovação de adesões e a mecanotransdução em condições normais e relevantes para doenças.

p21-ARC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARPC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p21-ARC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARPC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARPC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p21-ARC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARPC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p21-ARC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p21-ARC em células tumorais com expressão de ARPC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.