P-cadherin Plasmide Double Nickase (h): sc-400507-NIC

CDH3 codifica la P-caderina, una classica molecola di adesione cellula‑cellula calcio‑dipendente localizzata nelle giunzioni aderenti, dove si collega alle catenine e al citoscheletro di actina per regolare la coesione epiteliale, la polarità e la morfogenesi dei tessuti. Modulando la stabilità delle giunzioni e la segnalazione dipendente dal contatto, la P-caderina influenza vie che governano la migrazione cellulare, la differenziazione e il rimodellamento del citoscheletro, incluse interazioni con la via WNT/β‑catenina e con le reti di GTPasi della famiglia Rho. Un'alterata espressione di CDH3 o un'organizzazione anomala delle giunzioni è associata a un'architettura epiteliale compromessa ed è stata studiata nel contesto di fenotipi legati all'invasione e all'eterogeneità tumorale. CDH3 è inoltre implicato in disturbi epiteliali dello sviluppo ed ereditari, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione guidata dall'adesione e sulla funzione di barriera.

P-cadherin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDH3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDH3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDH3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDH3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.