Plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUD5 (m): sc-424913

Présentation

Otud5 code pour OTUD5, une déubiquitinase de la famille des tumeurs ovariennes (OTU) qui retire des chaînes d’ubiquitine de substrats protéiques afin de moduler leur stabilité et l’intensité des signaux qu’ils véhiculent. L’activité d’OTUD5 s’inscrit à l’interface du contrôle, dépendant de l’ubiquitine, des réponses aux dommages de l’ADN, de la signalisation de l’immunité innée et de programmes transcriptionnels régulés par le stress, influençant la manière dont les cellules coordonnent l’activation des points de contrôle et les signaux inflammatoires. Dans des modèles murins et des systèmes cellulaires, la perturbation de la déubiquitination associée à OTUD5 peut modifier la protéostasie et le flux des voies de signalisation dans des processus liés à des phénotypes neurodéveloppementaux et pertinents pour l’immunité. Ces caractéristiques font d’Otud5 un nœud utile pour analyser les mécanismes d’édition de l’ubiquitine qui ajustent la transduction du signal et l’intégrité du génome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUD5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Otud5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Otud5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Otud5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OTUD5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Otud5 pour l'étude de la signalisation de OTUD5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Otud5 essentiels à la fonction de OTUD5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Otud5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OTUD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OTUD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Otud5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OTUD5 plasmide HDR (m) et le OTUD5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Otud5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Otud5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.