OSC CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-421475

개요

Lss는 소포체(endoplasmic reticulum, ER)에 연관된 핵심 효소인 옥시도스쿠알렌 사이클레이스(oxidosqualene cyclase, OSC)를 암호화하며, 2,3-옥시도스쿠알렌을 라노스테롤로 고리화하여 메발론산 경로에서 스테롤 분지로의 대사 플럭스를 본격적으로 유도한다. OSC는 스테롤 생합성을 조절함으로써 막 콜레스테롤 조성, 지질 뗏목(lipid raft) 조직화, 그리고 그 하위의 스테로이드 생성 능력에 영향을 준다. 스테롤 대사의 교란은 전반적으로 지질 항상성 조절 이상 및 세포 스트레스 프로그램과 연관되어 있어, Lss는 생리 및 질병 관련 맥락에서 대사 재편성을 연구하기에 유용한 지점이다. 마우스 모델에서 Lss/OSC의 기능 교란은 스테롤 경로의 제약이 세포 성장, 분화, 그리고 막 지질 조성에 민감한 신호전달 네트워크에 어떤 영향을 미치는지 탐구할 수 있는 다루기 쉬운 접근법을 제공한다.

OSC CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Lss 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Lss 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Lss의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 OSC 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 OSC 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Lss 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• OSC 기능에 중요한 Lss 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Lss 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• OSC CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 OSC CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Lss 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  OSC HDR 플라스미드 (m) 및 OSC HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Lss 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Lss 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.