OSC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421475

Übersicht

Lss kodiert die Oxidosqualen-Cyclase (OSC), ein zentrales, mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das 2,3‑Oxidosqualen zu Lanosterol zyklisiert und damit den Stofffluss in den Sterolzweig des Mevalonatwegs festlegt. Durch die Kontrolle der Sterolbiosynthese beeinflusst OSC die Cholesterinzusammensetzung von Membranen, die Organisation von Lipid-Rafts und die nachgelagerte steroidogene Kapazität. Störungen des Sterolstoffwechsels werden allgemein mit einer dysregulierten Lipidhomöostase und zellulären Stressprogrammen in Verbindung gebracht, wodurch Lss einen nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung metabolischer Umprogrammierung in physiologischen und krankheitsrelevanten Kontexten darstellt. In Mausmodellen bietet die Störung von Lss/OSC einen gut handhabbaren Zugang, um zu untersuchen, wie Einschränkungen im Sterolweg Zellwachstum, Differenzierung und Signalnetzwerke beeinflussen, die empfindlich auf die Lipidzusammensetzung der Membran reagieren.

Das OSC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lss-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lss-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lss nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OSC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lss-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OSC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lss-Exone abzielen, die für die OSC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lss-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OSC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom OSC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lss-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OSC HDR-Plasmid (m) und OSC HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lss-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lss-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.