ORP150 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419398

概要

Hyou1はORP150（hypoxia upregulated protein 1としても知られる）をコードしており、低酸素、グルコース欠乏、その他の細胞ストレス下でタンパク質の折り畳みと品質管理を支える、小胞体（ER）常在性のHSP70ファミリー分子シャペロンです。ORP150はERのプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークの中で機能し、PERK–eIF2α、IRE1–XBP1、ATF6などのアンフォールドタンパク質応答（UPR）経路と協調して、ミスフォールドタンパク質の蓄積を抑え、分泌経路の完全性を維持します。マウスモデルや細胞系では、ORP150活性の変化が、細胞生存、炎症、代謝恒常性に影響するストレス適応機構と関連づけられています。ERストレス処理やプロテオスタシスの破綻は、低酸素やプロテオトキシックストレスが顕著な虚血性障害、神経変性、腫瘍微小環境の生物学に関する研究において重要なテーマです。

ORP150 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHyou1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hyou1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hyou1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ORP150タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ORP150シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hyou1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ORP150の機能に不可欠なHyou1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hyou1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ORP150 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびORP150 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hyou1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ORP150 HDRプラスミド（m）および ORP150 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHyou1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHyou1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。