ORP150 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419398
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ORP150 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico ORP150, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ORP150 Anticorpo (A-3): sc-398224
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ORP150 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419398 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Hyou1 codifica a ORP150 (também conhecida como proteína 1 induzida por hipóxia), uma chaperona da família HSP70 residente no retículo endoplasmático, que auxilia o dobramento de proteínas e o controle de qualidade durante hipóxia, privação de glicose e outros estresses celulares. A ORP150 atua nas redes de proteostase do RE, coordenando-se com vias da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), como PERK–eIF2α, IRE1–XBP1 e ATF6, para limitar o acúmulo de proteínas mal dobradas e manter a integridade da via secretória. Em modelos de camundongo e sistemas celulares, alterações na atividade da ORP150 têm sido associadas a mecanismos de adaptação ao estresse que afetam a sobrevivência celular, a inflamação e a homeostase metabólica. A desregulação do manejo do estresse do RE e da proteostase é relevante para estudos de lesão isquêmica, neurodegeneração e biologia do microambiente tumoral, em que a hipóxia e o estresse proteotóxico são proeminentes.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ORP150 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Hyou1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Hyou1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Hyou1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ORP150.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Hyou1 para a investigação da sinalização de ORP150, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Hyou1 críticos para a função ORP150
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Hyou1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo ORP150 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ORP150 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Hyou1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo ORP150 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ORP150 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Hyou1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Hyou1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.