Plásmido CRISPR de Activación (h) OPN1LW: sc-417309-ACT

OPN1LW codifica la opsina sensible a longitudes de onda largas (opsina L de los conos), un fotopigmento tipo GPCR expresado en los fotorreceptores cono de la retina que inicia la fototransducción en respuesta a la luz roja. Tras la absorción de un fotón y la isomerización del 11-cis-retinal, OPN1LW activa la cascada transducina–PDE6 para reducir los niveles de cGMP, cerrar los canales regulados por nucleótidos cíclicos y modular el potencial de membrana y la señalización sináptica en la vía visual. Su expresión está estrechamente controlada por programas transcripcionales específicos de conos y por el contexto de cromatina dentro del clúster génico de las opsinas en Xq28, lo que contribuye al ajuste espectral y a la identidad de los subtipos de conos. Las variantes y la expresión desregulada de OPN1LW se asocian con deficiencias hereditarias de la visión del color y con disfunción de los fotorreceptores cono, proporcionando un punto de entrada molecular para estudiar las relaciones genotipo–fenotipo en la biología de la visión humana.

OPN1LW El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OPN1LW sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OPN1LW El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OPN1LW en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OPN1LW, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OPN1LW. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OPN1LW y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OPN1LW en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OPN1LW en células tumorales con expresión de OPN1LW silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.