OPN1LW CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417309-ACT

OPN1LWは、長波長感受性オプシン（L錐体オプシン）をコードしており、網膜の錐体視細胞に発現するGPCR様の光色素として、赤色光に応答して視覚の光伝達（フォトトランスダクション）を開始します。光子吸収と11-cis-レチナールの異性化により、OPN1LWはトランスデューシン–PDE6カスケードを活性化し、cGMP濃度を低下させ、環状ヌクレオチド依存性（CNG）チャネルを閉鎖するとともに、視覚経路における膜電位およびシナプスシグナル伝達を調節します。その発現は、Xq28上のオプシン遺伝子クラスターにおける錐体特異的な転写プログラムとクロマチン環境によって厳密に制御され、スペクトルチューニングや錐体サブタイプの同一性の形成に寄与します。OPN1LWの変異や発現制御の破綻は、遺伝性の色覚異常や錐体視細胞機能障害と関連しており、ヒト視覚生物学における遺伝子型—表現型の関係を研究するための分子レベルの手がかりを提供します。

OPN1LW CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OPN1LWの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OPN1LW CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OPN1LW 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOPN1LW転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OPN1LWの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOPN1LW遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOPN1LW依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOPN1LW発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOPN1LW経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。