OMP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403257-ACT

A OMP humana (proteína marcadora olfatória) codifica uma pequena proteína citosólica altamente enriquecida em neurônios sensoriais olfatórios maduros, onde sustenta a transdução de sinais evocada por odores e a maturação neuronal. A OMP modula a dinâmica intracelular de segundos mensageiros, incluindo processos dependentes de cAMP e de Ca2+, influenciando a cinética da resposta e a adaptação na via olfatória. Alterações na expressão de OMP são amplamente utilizadas como indicador do estado de diferenciação dos neurônios olfatórios e da integridade dos circuitos em estudos de neurobiologia sensorial. A desregulação da função e da maturação dos neurônios olfatórios é relevante para investigações de hiposmia/anosmia e para contextos neurodesenvolvimentais ou neurodegenerativos mais amplos, nos quais déficits olfatórios podem servir como um fenótipo mensurável.

OMP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OMP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OMP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OMP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OMP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OMP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OMP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OMP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OMP em células tumorais com expressão de OMP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.