OMP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403257-ACT

Humanes OMP (olfactory marker protein) kodiert ein kleines zytosolisches Protein, das in reifen olfaktorischen sensorischen Neuronen stark angereichert ist und dort die geruchsinduzierte Signaltransduktion sowie die neuronale Reifung unterstützt. OMP moduliert die intrazelluläre Dynamik von Second Messengern, einschließlich cAMP- und Ca2+-abhängiger Prozesse, und beeinflusst damit Antwortkinetik und Adaptation im olfaktorischen System. Eine veränderte OMP-Expression wird in Studien der sensorischen Neurobiologie häufig als Marker für den Differenzierungszustand olfaktorischer Neuronen und die Integrität der Verschaltung verwendet. Eine Fehlregulation von Funktion und Reifung olfaktorischer Neuronen ist relevant für Untersuchungen zu Hyposmie/Anosmie sowie in breiteren neuroentwicklungsbiologischen oder neurodegenerativen Kontexten, in denen olfaktorische Defizite als messbarer Phänotyp dienen können.

OMP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OMP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OMP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OMP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OMP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OMP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OMP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OMP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OMP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OMP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.