OLFM2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-434096-ACT

O gene **Olfm2** de camundongo codifica a olfactomedina 2 (OLFM2), uma glicoproteína secretada/associada à matriz extracelular (MEC) implicada na regulação de interações célula–célula e célula–matriz que moldam a organização tecidual e a conectividade neuronal. A OLFM2 está associada à remodelação da matriz extracelular e a processos de sinalização que influenciam adesão, migração e diferenciação celulares, com relevância particular para a biologia do neurodesenvolvimento e das sinapses. Estudos de expressão e função situam a OLFM2 em vias que governam o crescimento de neuritos e a maturação de circuitos, nas quais alterações em sinais extracelulares podem afetar excitabilidade e plasticidade. A atividade desregulada de OLFM2 tem sido investigada no contexto de fenótipos do sistema nervoso e de mecanismos de doença mais amplos envolvendo mudanças no microambiente extracelular, sustentando sua utilidade como alvo mecanístico em genômica funcional.

OLFM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Olfm2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OLFM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Olfm2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Olfm2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OLFM2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Olfm2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OLFM2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OLFM2 em células tumorais com expressão de Olfm2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.