Oct-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401826-ACT

POU3F1 (Oct-6) codifica um fator de transcrição com domínio POU que regula a especificação de linhagens e programas de diferenciação, com papéis de destaque em células derivadas da crista neural e no desenvolvimento de células de Schwann. Oct-6 modula redes transcricionais que controlam a saída do ciclo celular, a expressão de genes associados à mielinização e o timing do desenvolvimento, por meio da ligação a promotores/realçadores e da cooperação com outros reguladores transcricionais. A atividade desregulada de POU3F1 tem sido associada a estados de diferenciação aberrantes e a capacidade proliferativa alterada, tornando-o relevante para estudos de vias do neurodesenvolvimento, biologia da glia e plasticidade celular conduzida por fatores de transcrição. Em modelos celulares humanos, Oct-6 funciona como um nó para investigar o circuito de regulação gênica subjacente a decisões de destino celular e à transcrição responsiva ao estresse.

Oct-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POU3F1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Oct-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POU3F1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POU3F1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Oct-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POU3F1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Oct-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Oct-6 em células tumorais com expressão de POU3F1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.