OAS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404302-ACT

A OAS2 humana (2′-5′-oligoadenilato sintetase 2) é uma enzima estimulada por interferon que detecta RNA viral de dupla fita e catalisa a síntese de oligoadenilatos ligados por 2′-5′, os quais ativam a RNase L para promover a degradação de RNA viral e celular. Esse eixo OAS2–RNase L é um componente central da defesa antiviral inata e molda programas inflamatórios e de resposta ao estresse a jusante, intersectando-se com a sinalização de interferon do tipo I e com vias de receptores de reconhecimento de padrões. Alterações na atividade da OAS2 e em assinaturas de expressão têm sido associadas a respostas ao interferon desreguladas, implicadas na suscetibilidade a vírus, inflamação crônica e fenótipos autoimunes. Como resultado, a OAS2 é frequentemente estudada em interações hospedeiro–patógeno, redes transcricionais dirigidas por citocinas e na regulação da sinalização imune dependente da degradação de RNA.

OAS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OAS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OAS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OAS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OAS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OAS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OAS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OAS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OAS2 em células tumorais com expressão de OAS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.