Nurr1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421994-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nurr1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nurr1 Double Nickase Plasmid (m) e il Nurr1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nr4a2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nurr1 Antibody (F-5): sc-376984
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nurr1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nurr1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Nr4a2 codifica Nurr1, un fattore di trascrizione appartenente alla famiglia dei recettori nucleari orfani, essenziale per lo sviluppo, il mantenimento e la resilienza allo stress dei neuroni dopaminergici del mesencefalo nel topo. Nurr1 regola programmi genici che controllano la sintesi e il trasporto della dopamina, l’omeostasi mitocondriale e la segnalazione antinfiammatoria, integrandosi con reti trascrizionali guidate dai recettori nucleari. Modula inoltre le risposte di microglia e astrociti attraverso la repressione dell’espressione di geni pro‑infiammatori, contribuendo all’omeostasi neuro‑immunitaria. La disregolazione delle vie dipendenti da Nurr1 è implicata nella neurodegenerazione e nella disfunzione sinaptica, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in modelli di fenotipi parkinsoniani e di altri quadri neurologici correlati.
Nurr1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nr4a2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nr4a2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nr4a2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nr4a2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.