Nup107 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405252-ACT

NUP107 codifica a Nup107, um componente central do subcomplexo Nup107–160 do complexo do poro nuclear, que sustenta o transporte núcleo–citoplasma de proteínas e RNAs. Para além de regular essa passagem, a Nup107 contribui para a organização do envelope nuclear, a progressão mitótica e a montagem do fuso, ligando o tráfego nucleocitoplasmático ao controlo do ciclo celular e às vias de estabilidade do genoma. A perturbação da arquitetura do poro nuclear e da seletividade do transporte pode remodelar programas transcricionais e respostas ao stress, tornando o NUP107 um nó útil para estudar a regulação dependente do transporte nuclear. Alterações na função de nucleoporinas têm sido associadas a fenótipos do desenvolvimento e a estados celulares relacionados com cancro, conferindo relevância mecanística para investigação biomédica focada na proliferação e na homeostase nuclear.

Nup107 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NUP107 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nup107 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NUP107 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NUP107, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nup107. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NUP107 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nup107 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nup107 em células tumorais com expressão de NUP107 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.