NUDT8 Double Nickase Plasmid (m): sc-425987-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NUDT8 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NUDT8 Double-Nickase-Plasmid (m) und NUDT8 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nudt8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NUDT8 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425987-NIC | 20 µg | $410.00 |
Nudt8 kodiert NUDT8, ein Mitglied der Nudix-Hydrolase-Familie, das an der „Bereinigung“ des zellulären Nukleotidpools beteiligt ist, indem es potenziell mutagene oder signalaktive Nukleotid-Diphosphat-Derivate hydrolysiert. Durch die Regulation der Menge oxidierter oder nicht-kanonischer Nukleotide kann NUDT8 die Genauigkeit der DNA-Replikation, redoxassoziierte Stressantworten und Signalwege des Nukleotidstoffwechsels beeinflussen, die mit der Homöostase von Mitochondrien und Peroxisomen verknüpft sind. Eine dysregulierte Nukleotid-Bereinigung ist allgemein relevant für Genominstabilität und Phänotypen inflammatorischen Stresses, weshalb Nudt8 ein nützliches Ziel ist, um Mechanismen zu untersuchen, die den Stoffwechselzustand mit der Anfälligkeit für DNA-Schäden koppeln. Studien zu Maus-Nudt8 können helfen, gewebespezifische Rollen von Nudix-Enzymen bei der Bewältigung oxidativen Stresses und der Qualitätskontrolle von Nukleinsäuren zu klären.
NUDT8 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nudt8-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nudt8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nudt8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nudt8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.