NUAK1/ARK5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429607

Descripción general

Nuak1 codifica NUAK1/ARK5, una quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas relacionadas con AMPK que vincula el estado energético celular con programas adaptativos que controlan la supervivencia, la polaridad, la adhesión y la remodelación del citoesqueleto. La señalización de NUAK1 se ha asociado con la regulación de la actividad de la fosfatasa de miosina, cascadas de quinasas sensibles al estrés y la coordinación de respuestas metabólicas bajo limitación de nutrientes. En sistemas murinos, la actividad de NUAK1/ARK5 se utiliza para estudiar cómo las vías de detección de energía se interconectan con la migración, comportamientos similares a la invasión y la resistencia a la apoptosis inducida por estrés. La desregulación de la función de NUAK1/ARK5 se ha implicado en fenotipos oncogénicos y metabólicos, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en modelos de biología tumoral y estrés celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NUAK1/ARK5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nuak1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nuak1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nuak1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NUAK1/ARK5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nuak1 para la investigación de la señalización de NUAK1/ARK5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nuak1 críticos para la función de NUAK1/ARK5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nuak1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nuak1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NUAK1/ARK5 (m) y el plásmido HDR NUAK1/ARK5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nuak1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nuak1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.