CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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NTCP Double Nickaseプラスミド (h): sc-400840-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NTCP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NTCPダブルニカースプラスミド（h）およびNTCPダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC10A1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: NTCP 抗体 (D-5): sc-518115
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NTCP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400840-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NTCP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400840-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC10A1は、ナトリウム／タウロコール酸共輸送ポリペプチド（NTCP）をコードしており、NTCPは肝細胞の基底側膜に存在するトランスポーターとして、門脈血から抱合胆汁酸およびその他の有機アニオンをナトリウム依存的に取り込む働きを担う。NTCP活性は腸肝循環における胆汁酸の循環に不可欠であり、輸送と代謝恒常性を結び付けるFXR制御下の転写プログラムを含む、細胞内の胆汁酸活性化シグナル伝達ネットワークにも影響を与える。SLC10A1／NTCP機能の変化は胆汁酸の取り扱いと肝生理を乱し、胆汁うっ滞性表現型や、より広範な脂質・糖代謝の調節異常への機序的な関連をもたらし得る。さらにNTCPは、病原体が肝細胞へ侵入する際の宿主因子としても機能するため、肝指向性の感染生物学や受容体介在性取り込み過程の研究において重要である。
NTCP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC10A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC10A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC10A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC10A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。