NSFL1C p47 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402328-ACT

NSFL1C (p47) codifica uma proteína adaptadora que se liga à ATPase AAA+ VCP/p97 e ajuda a direcioná-la para substratos específicos no controlo de qualidade de proteínas dependente de ubiquitina. A NSFL1C p47 está implicada no tráfego de membranas e na dinâmica do Golgi/RE (retículo endoplasmático), incluindo eventos de remodelação mediados por cofatores de p97 que influenciam a fusão de vesículas e a reassemblagem de organelos. Através do seu papel na proteostase e em vias de degradação responsivas ao stress, como a degradação associada ao RE (ERAD), alterações na função de p47 podem modular a sensibilidade celular ao stress proteotóxico e a remodelação de compartimentos secretórios. A desregulação do eixo p97–cofator tem sido associada a neurodegeneração e a dependências de proteostase relacionadas com o cancro, tornando a NSFL1C um nó útil para estudos mecanísticos destes processos.

NSFL1C p47 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NSFL1C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NSFL1C p47 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NSFL1C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NSFL1C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NSFL1C p47. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NSFL1C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NSFL1C p47 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NSFL1C p47 em células tumorais com expressão de NSFL1C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.