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NRAMP 2慢病毒激活颗粒(h) | sc-418176-LAC | 200 µl | $455.00 |
SLC11A2 编码 NRAMP2(DMT1),这是一种质子偶联的二价金属离子转运蛋白,介导细胞对亚铁离子以及其他过渡金属的摄取,并促进其从内体向胞质侧输出。NRAMP2 在肠道铁吸收以及转铁蛋白循环过程中内体铁的释放中起核心作用,因此与内吞作用、囊泡酸化和金属稳态等通路密切相关;这些通路会影响线粒体代谢与氧化应激反应。SLC11A2 的失调与遗传性小细胞性贫血伴铁过载有关,并可导致与神经退行性变、炎症和代谢应激相关的铁处理表型。作为一种受情境依赖性调控的膜转运蛋白,NRAMP2 常被用于营养感知、氧化还原生物学以及宿主—病原体相互作用等模型研究,因为金属可用性会塑造细胞功能。
NRAMP 2 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 SLC11A2 表达。
NRAMP 2 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在SLC11A2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性NRAMP 2表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 SLC11A2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。