NQO1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400326-ACT

Humanes NQO1 (NAD(P)H-Quinon-Dehydrogenase 1) ist ein zytosolisches Flavoprotein, das die Zwei-Elektronen-Reduktion von Chinonen zu Hydrochinonen katalysiert und dadurch Redox‑Cycling sowie die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies begrenzt. Es fungiert als zentraler Bestandteil zellulärer Entgiftungs- und antioxidativer Abwehrprogramme und steht an der Schnittstelle von Xenobiotika-Metabolismus und NRF2/KEAP1‑regulierten Antworten auf oxidativen Stress. Durch die Modulation des zellulären Redoxzustands und des Chinonstoffwechsels beeinflusst NQO1 die Proteinstabilität sowie stressadaptive Signalwege, die Proliferation und Überleben unter elektrophiler oder oxidativer Belastung prägen. Veränderte Expression und Aktivität von NQO1 wurden mit Unterschieden in der Chemikalienempfindlichkeit und mit Redox-Ungleichgewichten in verschiedenen krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, darunter die Krebsbiologie und Modelle entzündlichen Stresses.

NQO1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NQO1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NQO1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NQO1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NQO1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NQO1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NQO1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NQO1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NQO1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NQO1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.