NPC1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401741

概要

NPC1L1（Niemann-Pick C1-like 1）は、多回膜貫通型の膜タンパク質で、食事由来および胆汁由来のコレステロールやその他のステロールの細胞内取り込みを担います。形質膜に加え、エンドサイトーシス輸送に関わる細胞内コンパートメントでも機能します。NPC1L1はステロール感知や小胞輸送プロセスに関与し、細胞内の脂質恒常性やリポタンパク質の取り扱いに影響を与えます。NPC1L1の活性は、コレステロール吸収、膜組成、脂質依存的シグナル伝達を制御する経路と交差しています。NPC1L1に関連するステロール輸送の制御異常は、コレステロールバランスの変化や脂質駆動性の炎症状態に結び付く代謝表現型と関連します。

NPC1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNPC1L1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NPC1L1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NPC1L1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NPC1L1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NPC1L1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NPC1L1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NPC1L1の機能に不可欠なNPC1L1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NPC1L1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NPC1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNPC1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NPC1L1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NPC1L1 HDRプラスミド（h）および NPC1L1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNPC1L1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNPC1L1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。