NP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403815-ACT

NPTX2 codifica a pentraxina neuronal 2 (NP2), uma proteína sináptica secretada implicada na remodelação de sinapses dependente de atividade e na maturação de circuitos excitatórios. A NP2 participa de vias reguladas pela atividade neuronal que influenciam o agrupamento de receptores sinápticos e as interações com a matriz extracelular, sustentando processos como sinaptogênese, plasticidade e estabilidade de redes neurais. Alterações na expressão de NPTX2 têm sido associadas à biologia de doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas, nas quais disfunção sináptica e desequilíbrio entre excitação e inibição são características comuns. Como um marcador molecular da atividade neuronal e da integridade sináptica, a NP2 é amplamente estudada em modelos de remodelação de circuitos, respostas ao estresse e alterações sinápticas associadas à inflamação.

NP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPTX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPTX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPTX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPTX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NP2 em células tumorais com expressão de NPTX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.