Nop14 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408567-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Nop14 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Nop14ダブルニカースプラスミド（h）およびNop14ダブルニカースプラスミド（h2）は、NOP14を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Nop14 抗体 (B-5): sc-398763
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Nop14 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408567-NIC | 20 µg | $410.00 |
ヒトのNOP14は、リボソーム生合成に必須の核小体タンパク質Nop14をコードしており、特にpre-rRNAのプロセシングと前リボソーム粒子の組み立てを通じて、40S小リボソームサブユニットの成熟に関与します。効率的なリボソーム産生を支えることで、Nop14は細胞増殖制御、細胞周期の進行、ならびに核小体機能やストレス応答と密接に結び付いたプロテオスタシス経路に影響を及ぼします。NOP14を含むリボソーム生合成因子の制御異常は、増殖の破綻やゲノム不安定性との関連で研究されており、がん生物学における機序解明や、核小体機能不全に関連するその他の疾患の研究にも重要です。また、NOP14は、リボソーム組み立ての攪乱が全体的な翻訳プログラムおよび下流のシグナル伝達ネットワークをどのように再編成するかを検討するためのノードとしても用いられます。
Nop14 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NOP14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NOP14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NOP14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NOP14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。