Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nolz-1: sc-405058-ACT

Le gène humain ZNF503 code le facteur de transcription à doigts de zinc Nolz-1, un régulateur nucléaire qui façonne des programmes d’expression génique gouvernant la spécification du destin cellulaire, la différenciation et la mise en place des territoires tissulaires. L’activité de Nolz-1 est couramment étudiée dans le contexte des réseaux d’activation/répression transcriptionnelle et des interactions entre voies de signalisation du développement, qui influencent l’engagement de lignée et la morphogenèse. Une expression dérégulée de ZNF503 a été associée à des états de différenciation altérés et à des phénotypes prolifératifs dans plusieurs cadres de recherche sur les maladies, notamment en biologie du cancer et dans des modèles de neurodéveloppement. En tant que régulateur se liant à l’ADN, Nolz-1 constitue un nœud exploitable pour disséquer les signaux régulateurs en amont et les cibles transcriptionnelles en aval qui contrôlent l’identité cellulaire.

Nolz-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF503 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nolz-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF503 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF503, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nolz-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF503 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nolz-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nolz-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF503 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.