Nogo Plasmide Double Nickase (h): sc-400819-NIC

RTN4 codifica Nogo, una proteina associata al reticolo endoplasmatico e alla superficie cellulare, nota soprattutto per la regolazione della crescita dei neuriti, della guida assonale e del rimodellamento sinaptico attraverso interazioni con i complessi del recettore di Nogo e la segnalazione a valle RhoA/ROCK. Nel sistema nervoso centrale, Nogo contribuisce alla plasticità strutturale dipendente dall’attività e limita la formazione di nuove ramificazioni rigenerative dopo una lesione, collegando RTN4 a vie che controllano la dinamica del citoscheletro e la motilità del cono di crescita. Al di là dei neuroni, RTN4 partecipa alla curvatura di membrana e all’organizzazione dei tubuli del reticolo endoplasmatico, influenzando il traffico intracellulare e le risposte allo stress. La deregolazione della segnalazione di Nogo è stata studiata nel contesto della neurodegenerazione, di patologie demielinizzanti e di altre condizioni in cui risultano alterati la connettività assonale e i processi di riparazione.

Nogo Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RTN4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RTN4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RTN4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RTN4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.