Noggin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402090-ACT

O gene humano **NOG** codifica a nogina, uma glicoproteína secretada do tipo *cystine-knot* que atua como antagonista de alta afinidade de ligantes da família BMP, incluindo BMP2, BMP4 e BMP7, restringindo assim a sinalização SMAD1/5/8. Ao sequestrar BMPs, a nogina ajuda a regular o padrão embrionário, a diferenciação osteocondrogênica e a morfogênese tecidual, com efeitos a jusante sobre decisões de destino celular e programas da matriz extracelular. Alterações na dosagem ou na atividade de **NOG** estão associadas a fenótipos esqueléticos do desenvolvimento e a malformações congênitas envolvendo a formação de articulações e o padrão craniofacial ou de membros, refletindo uma saída desregulada da via de BMP. *In vitro*, **NOG** serve como um nó-chave para dissecar a comunicação cruzada entre as vias BMP/TGF-β durante a diferenciação e em gradientes de sinalização guiados por morfógenos.

Noggin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Noggin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Noggin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Noggin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Noggin em células tumorais com expressão de NOG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.