NMDAε1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400963
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NMDAε1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico NMDAε1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NMDAε1 Anticorpo (E-4): sc-515148
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NMDAε1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400963 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O GRIN2A codifica a subunidade do receptor NMDA NMDAε1 (GluN2A), um componente de canal iônico ativado por glutamato que se monta com outras subunidades do receptor NMDA para mediar a neurotransmissão excitatória permeável a Ca²⁺. Essa subunidade ajuda a definir a cinética do receptor e a força da sinalização sináptica, sustentando processos de plasticidade sináptica dependentes de atividade, como a potenciação de longa duração e a depressão de longa duração. A NMDAε1 participa de redes de sinalização pós-sinápticas que acoplam o fluxo iônico a programas transcricionais dependentes de CaMK/CREB e a uma homeostase mais ampla de circuitos excitatórios/inibitórios. Variações genéticas ou desregulação de GRIN2A têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e do espectro das epilepsias, e têm sido estudadas no contexto de disfunção sináptica relevante para mecanismos de doenças neurológicas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NMDAε1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GRIN2A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GRIN2A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GRIN2A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NMDAε1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GRIN2A para a investigação da sinalização de NMDAε1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GRIN2A críticos para a função NMDAε1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GRIN2A para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo NMDAε1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NMDAε1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GRIN2A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo NMDAε1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NMDAε1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GRIN2A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GRIN2A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.