Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406906

概要

NKX3-2は、ホメオボックス型転写因子Nkx-3.2をコードしており、発生過程における遺伝子発現プログラムを制御する核内のDNA結合タンパク質である。特に、軟骨形成（chondrogenesis）や体軸骨格のパターニングを担うプログラムの制御に関与する。Nkx-3.2は、BMPやTGF-βファミリー由来のシグナルを含むモルフォゲンシグナル伝達の下流で転写ネットワークを統合することにより、系譜決定と分化を調節する。NKX3-2活性の変化は、軟骨および骨格の発生異常と関連しており、先天性骨格異形成や頭蓋顔面のパターニング機構の文脈でしばしば研究されている。細胞ベースの実験系では、NKX3-2は間葉系分化の転写制御や細胞外マトリックス関連遺伝子の制御を解析するための扱いやすい標的（ノード）となる。

Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNKX3-2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NKX3-2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NKX3-2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nkx-3.2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nkx-3.2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NKX3-2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nkx-3.2の機能に不可欠なNKX3-2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NKX3-2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNkx-3.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NKX3-2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nkx-3.2 HDRプラスミド（h）および Nkx-3.2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNKX3-2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNKX3-2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。