NKCC1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-422971-LAC

Slc12a2 kodiert den Na⁺-K⁺-2Cl⁻-Cotransporter NKCC1, einen weit verbreiteten elektroneutralen Transporter, der Natrium- und Kaliumgradienten mit dem Chlorideinstrom koppelt und dadurch die intrazelluläre Cl⁻-Homöostase, das Zellvolumen sowie die epitheliale Flüssigkeitssekretion reguliert. In Mausgeweben trägt NKCC1 zur Ionen- und Wasserbewegung über Epithelien bei, beeinflusst über chloridabhängige GABAerge Signalübertragung die neuronale Erregbarkeit und unterstützt sekretorische Antworten sowie Reaktionen auf osmotischen Stress. Die NKCC1-Aktivität ist in die WNK–SPAK/OSR1-Kinase-Signalgebung eingebunden und interagiert funktionell mit KCC-Cotransportern, um den zellulären Chloridgehalt einzustellen. Fehlregulierte, NKCC1-gekoppelte Transportprozesse werden mit Ödemen und Barrierefunktionsstörungen, veränderter Aktivität neuronaler Netzwerke sowie Pathophysiologie infolge gestörter Salz- und Wasserbalance in Verbindung gebracht, wodurch Slc12a2 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien der Transportbiologie ist.

NKCC1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Slc12a2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NKCC1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Slc12a2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NKCC1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Slc12a2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.