Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401605-ACT

CHRNA4 codifica a subunidade α4 dos recetores nicotínicos neuronais de acetilcolina (nAChRs), que se montam como canais catiônicos ativados por ligando e medeiam a transmissão sináptica rápida no sistema nervoso central. Os recetores que contêm α4, frequentemente formando complexos α4β2, regulam a despolarização da membrana e a sinalização dependente de cálcio que influenciam a libertação de neurotransmissores, a excitabilidade neuronal e a plasticidade sináptica. Por meio da sinalização colinérgica, CHRNA4 contribui para vias que governam a atenção, o estado de alerta, a aprendizagem e os circuitos relacionados com recompensa, e alterações na função do recetor têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, incluindo suscetibilidade à epilepsia e dependência de nicotina. Assim, modular a expressão de CHRNA4 é relevante para estudar a estequiometria do recetor, a biofísica do canal e programas de transcrição dependentes da atividade em modelos neuronais humanos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 em células tumorais com expressão de CHRNA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.