NFKBIA/IkB alpha Double Nickaseプラスミド (h): sc-400034-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NFKBIA/IkB alpha Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NFKBIA/IkB alphaダブルニカースプラスミド（h）およびNFKBIA/IkB alphaダブルニカースプラスミド（h2）は、NFKBIAを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: p-NFKBIA/IkB alpha 抗体 (B-9): sc-8404
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NFKBIA/IkB alpha Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400034-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NFKBIA/IkB alpha Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400034-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFKBIAはIκBαをコードしており、RELA/p50複合体に結合してそれらを細胞質に隔離し、IKKによるリン酸化を契機とするユビキチン化およびプロテアソーム分解が起こるまで、カノニカルNF-κBシグナル伝達を抑制する中核的な阻害性制御因子です。このフィードバック制御機構を通じて、IκBαは炎症、自然免疫および獲得免疫、細胞生存、ストレス応答を司る、刺激依存的な転写プログラムを調節します。NFKBIAの活性または発現の破綻は、免疫介在性疾患や複数のがんの状況で広く観察されるNF-κB経路の異常活性化と関連しており、シグナル伝達の変化はサイトカインネットワーク、アポトーシス抵抗性、微小環境シグナルに影響し得ます。TNF、IL-1、TLR、ならびに抗原受容体経路の中心的な結節点として、NFKBIAはNF-κBダイナミクス、転写フィードバック、経路間クロストークを解明する目的で頻繁に研究されています。
NFKBIA/IkB alpha ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NFKBIA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NFKBIA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NFKBIAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NFKBIAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。