Plasmide CRISPR/Cas9 KO NFATc2 (h): sc-400422

Présentation

NFATC2 code NFATc2, un facteur de transcription régulé par le calcium et la calcineurine, qui coordonne des programmes d’expression génique en aval de la signalisation du récepteur des lymphocytes T et d’autres voies d’immunorécepteurs. Après déphosphorylation, NFATc2 se transloque dans le noyau et coopère avec AP-1 et d’autres cofacteurs pour réguler la production de cytokines, la différenciation induite par l’activation et la tolérance immunitaire. L’activité de NFATc2 intègre la signalisation Ca²⁺ avec les interactions croisées des voies MAPK et NF-κB, modulant la prolifération des lymphocytes et leurs fonctions effectrices. Une signalisation NFATC2 dérégulée a été associée à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns, et fait également l’objet d’études pour ses rôles dans les interactions tumeur–système immunitaire et dans des états transcriptionnels aberrants en biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NFATc2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NFATC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NFATC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NFATC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NFATc2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NFATC2 pour l'étude de la signalisation de NFATc2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NFATC2 essentiels à la fonction de NFATc2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NFATC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NFATc2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NFATc2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NFATC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NFATc2 plasmide HDR (h) et le NFATc2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NFATC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NFATC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.