Plasmide Double Nickase (h) NFATc1: sc-400164-NIC

NFATC1 code pour NFATc1, un facteur de transcription régulé par le calcium, activé en aval de la calcineurine en réponse à la signalisation du récepteur des cellules T et à d’autres voies d’immunorécepteurs. Après déphosphorylation, NFATc1 se transloque dans le noyau afin de coordonner des programmes transcriptionnels qui façonnent l’activation immunitaire, l’expression des cytokines et les états de différenciation, et il contribue également à l’ostéoclastogenèse ainsi qu’aux programmes de remodelage tissulaire. NFATc1 intègre la signalisation Ca2+/NFAT avec des signaux dépendants de MAPK et d’AP-1 afin d’ajuster finement l’expression génique selon le contexte. Une activité dérégulée de NFATC1 a été impliquée dans des phénotypes immunitaires et inflammatoires, ainsi que dans la reprogrammation transcriptionnelle associée au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des voies de signalisation.

NFATc1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NFATC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NFATC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NFATC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NFATC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.