NF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421882

概要

Neflは、軸索細胞骨格を構築するために他のニューロフィラメントサブユニットと重合する中間径フィラメントの中核タンパク質であるニューロフィラメント軽鎖ポリペプチド（NF-L）をコードします。NF-Lは、微小管およびアクチン依存性の輸送と連携するフィラメントネットワークを組織化することで、軸索径、機械的安定性、ならびに長距離輸送を支えます。ニューロフィラメントのアセンブリおよびリン酸化の動態は神経細胞の成熟と維持に寄与し、Neflの機能を細胞骨格の再構築や軸索の健全性を制御する経路と結び付けます。ニューロフィラメント恒常性の破綻は、神経変性や神経外傷の研究に広く関連しており、NF-Lの量や構造の変化は軸索ストレスや変性を反映します。

NF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNefl遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nefl内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Neflのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NF-Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NF-Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nefl欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NF-Lの機能に不可欠なNeflエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Neflゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nefl遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NF-L HDRプラスミド（m）および NF-L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNeflホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNefl標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。