Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neu1: sc-401488-ACT

NEU1 code la neuraminidase 1 humaine (Neu1), une sialidase lysosomale qui retire les acides sialiques terminaux des glycoprotéines et des glycolipides, modulant ainsi le catabolisme lysosomal et la composition des glycannes à la surface cellulaire. Neu1 agit au sein du complexe lysosomal multi-enzymatique et contribue au renouvellement et au trafic des substrats sialylés, en influençant la signalisation des récepteurs et les voies endocytiques via la régulation de la désialylation des protéines. Une activité altérée de NEU1 est liée à une perturbation de l’homéostasie lysosomale et à des profils de glycosylation aberrants qui affectent la signalisation inflammatoire et les processus d’adhérence cellulaire. Le dysfonctionnement de NEU1 est associé à des phénotypes de maladies de surcharge lysosomale, faisant de Neu1 une cible pertinente pour l’étude des mécanismes dépendants de la sialylation dans les cellules humaines.

Neu1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NEU1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neu1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NEU1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NEU1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neu1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NEU1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neu1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neu1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NEU1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.