nestin Lentiviral Activation Particles (h): sc-400156-LAC

Das humane NES-Gen kodiert Nestin, ein Intermediärfilamentprotein der Klasse VI, das neuronale Stamm-/Vorläuferzellen sowie weitere proliferative, undifferenzierte Zellzustände markiert. Nestin trägt zur Organisation des Zytoskeletts und zur Zellmechanik während Mitose, Migration und Linienfestlegung bei und ist funktionell in Programme des zytoskelettalen Umbaus eingebunden, die mit Wachstumsfaktor-Signalwegen koordiniert sind. Die NES-Expression wird während der Entwicklung dynamisch reguliert und bei Gewebereparatur sowie zellulären Stressantworten erneut induziert, was Verschiebungen hin zu vorläuferähnlichen Transkriptionsprogrammen widerspiegelt. Eine fehlregulierte Nestin-Expression ist häufig mit Tumorzellplastizität und invasiven Phänotypen assoziiert und stellt damit einen nützlichen molekularen Readout in Studien zu Stammzellcharakter, Differenzierung und Krebsbiologie dar.

nestin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NES-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

nestin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NES-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen nestin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NES-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.