nestin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400156-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- nestinO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase nestin (h) e o Plasmídeo Double Nickase nestin (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para NES. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:nestin Anticorpo (D-9): sc-377380
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
nestin Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
nestin Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene **NES** codifica a nestina, uma proteína de filamento intermediário de classe VI enriquecida em células-tronco e progenitoras neurais, onde dá suporte à organização do citoesqueleto durante a proliferação, migração e comprometimento de linhagem. A nestina participa da remodelação do citoesqueleto e de programas associados ao ciclo celular, integrando sinais de vias de desenvolvimento que regulam a “stemness” e a diferenciação, incluindo Notch, Wnt/β-catenina e a sinalização MAPK/PI3K-AKT induzida por fatores de crescimento. Sua expressão é amplamente usada como marcador de progenitores neuroepiteliais e de astróglia reativa, e é frequentemente induzida durante a remodelação tecidual e respostas ao estresse celular. A expressão desregulada de **NES** está associada a estados de diferenciação alterados e já foi relatada em múltiplos cânceres e em contextos de neurodesenvolvimento, o que a torna relevante para o estudo da biologia de progenitores e de transições de estado celular associadas a doenças.
nestin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NES em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NES. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NES. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NES interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.