Plasmide CRISPR d'Activation (h) neogenin: sc-401204-ACT

Le gène humain **NEO1** code la **néogénine**, un récepteur transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines qui médiatise des interactions cellule–cellule et cellule–matrice essentielles au patronnement des tissus et au développement neuronal. La néogénine se lie à des signaux de guidage tels que les **nétrines** et les **repulsive guidance molecules (RGM)**, reliant des signaux extracellulaires au remodelage du cytosquelette, à l’adhésion et aux voies de migration dirigée. Par ces interactions, **NEO1** contribue au guidage axonal, à l’extension des neurites et à l’organisation épithéliale, et a été étudié dans le contexte d’anomalies du développement ainsi que de modifications liées au cancer affectant les programmes d’invasion et de différenciation. Ses rôles dépendants du contexte dans la signalisation et la morphogenèse font de **NEO1** un nœud pertinent pour l’étude des circuits de guidage et de remodelage médiés par les récepteurs.

neogenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NEO1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

neogenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NEO1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NEO1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de neogenin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NEO1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de neogenin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie neogenin dans les cellules tumorales présentant une expression de NEO1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.