NEDD4-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429949

Visão geral

Nedd4l codifica a NEDD4-L, uma ligase E3 de ubiquitina com domínio HECT que regula a renovação de proteínas ao catalisar a ubiquitinação de proteínas de membrana e de sinalização, incluindo canais iónicos e transportadores como o ENaC. Ao modular a endocitose dependente de ubiquitina e a degradação lisossomal/proteassomal, a NEDD4-L influencia a homeostase iónica epitelial e vias de transdução de sinal implicadas em respostas ao stress celular e na remodelação tecidular. Em modelos murinos, alterações na atividade de Nedd4l têm sido associadas a desregulação do manuseamento de sódio e do controlo da pressão arterial, tendo sido investigadas em contextos de fisiologia renal, fenótipos cardiovasculares e sinalização inflamatória. A NEDD4-L também interage com vias que controlam a polaridade e a diferenciação celular, tornando-a relevante para estudos da função de barreira epitelial e de processos de desenvolvimento.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NEDD4-L (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Nedd4l em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Nedd4l, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Nedd4l na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NEDD4-L.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Nedd4l para a investigação da sinalização de NEDD4-L, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Nedd4l críticos para a função NEDD4-L
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Nedd4l para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NEDD4-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo NEDD4-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Nedd4l. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NEDD4-L Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR NEDD4-L (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Nedd4l para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Nedd4l definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.