NCOAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429251

概要

Mgea5 は NCOAT（O‑GlcNAcase とも呼ばれる）をコードしており、核内および細胞質タンパク質のセリン／スレオニン残基に結合した O 結合型 β‑N‑アセチルグルコサミン（O‑GlcNAc）を除去する主要酵素である。O‑GlcNAc 転移酵素とともに、NCOAT は栄養状態の感知とリン酸化依存的シグナル伝達を統合する動的な O‑GlcNAc サイクルを制御し、転写、細胞周期の進行、タンパク質恒常性、ストレス応答に影響を与える。NCOAT の活性は、転写因子、キナーゼ、細胞骨格タンパク質上の O‑GlcNAc レベルを調節することで、インスリン／AKT シグナル伝達、クロマチン制御、タンパク質品質管理などの経路に作用する。O‑GlcNAc 恒常性の破綻は代謝異常や神経変性に関連する表現型と結び付けられており、そのため Mgea5 はシグナル伝達やエピジェネティック制御を研究するマウスモデルにおける有用な標的となっている。

NCOAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMgea5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mgea5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mgea5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NCOATタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NCOATシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mgea5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NCOATの機能に不可欠なMgea5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mgea5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NCOAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNCOAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mgea5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NCOAT HDRプラスミド（m）および NCOAT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMgea5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMgea5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。