NCKX6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406101-ACT

SLC8B1 は NCKX6 をコードしており、NCKX6 はカリウム依存性の Na⁺/Ca²⁺ 交換輸送体として、Na⁺ と K⁺ の勾配を利用して細胞膜を介した Ca²⁺ の細胞外排出（efflux）に共役し、細胞内 Ca²⁺ 恒常性の維持に寄与します。NCKX6 は細胞質カルシウム動態を調整することで、興奮性、分泌、ならびに下流の転写応答を制御するカルシウム感受性のシグナル伝達ネットワークに影響を与え得ます。Ca²⁺ の取り扱い（ハンドリング）の異常は、細胞ストレス応答や、多様な疾患関連状況で観察されるシグナル異常に広く関与していることから、SLC8B1 はイオントランスポートに連動した経路の機構研究に有用な結節点（ノード）となります。NCKX6 の機能を検討することは、膜輸送プロセスがヒト細胞における Ca²⁺ 依存性経路や表現型とどのように統合されるのかを解明する研究を支援します。

NCKX6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC8B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NCKX6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC8B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC8B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NCKX6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC8B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNCKX6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC8B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNCKX6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。