Na⁺ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422819

概要

Scn1bはナトリウムチャネルβ1サブユニット（Na+ CP type Iβ）をコードしており、興奮性膜において電位依存性ナトリウムチャネルのゲーティング、細胞表面発現、およびチャネル複合体の安定性を調節する補助的構成要素です。活動電位の開始と伝播を形作ることに加え、SCN1Bは神経細胞―グリア相互作用や細胞接着過程にも関与し、これらはネットワーク興奮性や有髄軸索機能に影響を及ぼします。マウスでは、Scn1bの機能は膜興奮性、シナプス伝達、発作感受性を制御する経路と密接に関連しており、β1機能の変化はてんかんや、より広範な神経発達表現型と関連づけられています。これらの特性により、Scn1bはイオンチャネル制御と回路レベルの興奮性、ならびに神経疾患モデルを結びつける機構を解明するための有用な標的となります。

Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScn1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scn1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scn1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Na+ CP type Iβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Na+ CP type Iβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scn1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Na+ CP type Iβの機能に不可欠なScn1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scn1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNa+ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scn1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Na+ CP type Iβ HDRプラスミド（m）および Na+ CP type Iβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScn1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScn1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。