Nanos3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407364

Panoramica

NANOS3 codifica la proteina legante l’RNA Nanos3, un regolatore post-trascrizionale conservato, necessario per la sopravvivenza e il mantenimento delle cellule germinali primordiali umane. Nanos3 opera nei programmi di specificazione della linea germinale reprimendo la traduzione e promuovendo il turnover selettivo degli mRNA, integrandosi con vie di segnalazione che controllano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e l’apoptosi durante le prime fasi dello sviluppo. Un’attività deregolata di NANOS3 è stata associata a uno sviluppo compromesso delle cellule germinali e a fenotipi legati all’infertilità, e un’espressione alterata è stata riportata in alcuni tumori derivati da cellule germinali. In quanto determinante della linea germinale, NANOS3 rappresenta un nodo utile per analizzare le reti di regolazione dell’RNA e i programmi trascrizionali ristretti a specifiche linee cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nanos3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NANOS3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NANOS3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NANOS3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nanos3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NANOS3 per lo studio della segnalazione di Nanos3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NANOS3 critici per la funzione di Nanos3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NANOS3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nanos3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nanos3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NANOS3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nanos3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nanos3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NANOS3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NANOS3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.