N-SMase Double Nickase Plasmid (h): sc-405568-NIC

Das humane SMPD2 kodiert die neutrale Sphingomyelinase (N‑SMase), ein membranassoziiertes Enzym, das Sphingomyelin hydrolysiert und dabei Ceramid und Phosphocholin erzeugt. Auf diese Weise prägt es die Sphingolipidzusammensetzung und die daraus resultierenden Signalantworten. Die N‑SMase‑Aktivität trägt zur ceramidabhängigen Regulation von Stressantworten, der Dynamik von Membran-Mikrodomänen, dem endomembranären Transport sowie zur Wechselwirkung mit apoptotischen und inflammatorischen Signalprogrammen bei. Durch die Kontrolle des Ceramidflusses beeinflusst SMPD2 Signalwege, die mit ER‑Stress und Lipidhomöostase verknüpft sind, einschließlich nachgeschalteter Effekte auf die MAPK/NF‑κB‑Signalgebung und den vesikulären Transport. Eine dysregulierte Sphingolipidmetabolisierung unter Beteiligung von SMPD2 wurde in Kontexten wie Neurodegeneration, metabolischer Dysfunktion und krebsassoziierter Stressanpassung untersucht, was seine Relevanz als Forschungsziel in der Krankheitsbiologie unterstreicht.

N-SMase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SMPD2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SMPD2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SMPD2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SMPD2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.