Myosin X Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402204-ACT

O gene humano MYO10 codifica a miosina X, um motor não convencional baseado em actina, enriquecido nas extremidades dos filopódios, que sustenta a iniciação e o alongamento de filopódios, o transporte de cargas e a remodelação polarizada da membrana. A miosina X coordena o tráfego de integrinas e a maturação de adesões, ligando a dinâmica da actina à migração celular, ao crescimento de neuritos e a processos de orientação. Por meio de interações com a sinalização por fosfoinositídeos e reguladores do citoesqueleto, o MYO10 contribui para vias que controlam a motilidade protrusiva e a perceção da matriz extracelular. Alterações na expressão ou atividade de MYO10 têm sido associadas a fenótipos celulares invasivos e a uma morfogénese desregulada, tornando-o um nó útil para estudar mecanismos dependentes do citoesqueleto relevantes para a biologia do cancro e a investigação do neurodesenvolvimento.

Myosin X O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYO10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Myosin X O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYO10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYO10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Myosin X. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYO10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Myosin X no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Myosin X em células tumorais com expressão de MYO10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.