Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH1: sc-400420-ACT

MYH1 code la chaîne lourde de myosine 1, une protéine motrice du muscle squelettique à contraction rapide qui alimente la contraction dépendante de l’actine via un cycle de ponts actine‑myosine dépendant de l’ATP au sein du sarcomère. En tant que composant central du filament épais, MYH1 contribue à la spécification des types de fibres musculaires, à la génération de force et à la cinétique contractile, en s’intégrant à des voies qui régulent la myofibrillogenèse, la gestion du calcium et l’adaptation métabolique à l’activité. Les variations des profils d’expression des chaînes lourdes de myosine sont couramment utilisées pour étudier la différenciation du muscle squelettique, le remodelage et les réponses à la dénervation ou à des signaux mimant l’exercice. Les programmes géniques sarcomériques dérégulés, y compris les modifications de l’architecture contractile associée à MYH1, sont pertinents pour l’étude des myopathies et, plus largement, des mécanismes de dysfonction neuromusculaire.

MYH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.