MYBPC2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407591-ACT

MYBPC2 codifica la proteina C legante la miosina, di tipo rapido, una proteina sarcomerica associata ai filamenti spessi che modula il ciclo dei ponti trasversali actomiosinici e stabilizza l’organizzazione dei filamenti di miosina nel muscolo striato. Attraverso interazioni con la catena pesante della miosina e con la titina, MYBPC2 contribuisce alla prestazione contrattile e all’assemblaggio del sarcomero, influenzando la regolazione calcio-sensibile dello sviluppo della forza. L’alterazione dell’espressione o la disregolazione dei geni strutturali sarcomerici, incluso MYBPC2, è rilevante negli studi sul rimodellamento miofibrillare e sui fenotipi di performance muscolare. Nella ricerca biomedica umana, MYBPC2 viene spesso analizzato nel contesto dello sviluppo muscolare, delle risposte allo stress meccanico e delle vie che controllano l’integrità del sarcomero.

MYBPC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYBPC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYBPC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYBPC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYBPC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYBPC2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYBPC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYBPC2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYBPC2 nelle cellule tumorali con espressione di MYBPC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.