Plasmide CRISPR d'Activation (h) Muskelin: sc-409182-ACT

Le gène humain **MKLN1** code la muskéline, une protéine d’échafaudage multidomaine impliquée dans l’organisation de l’architecture du cytosquelette et la coordination du trafic intracellulaire. La muskéline a été associée à des processus dépendants de l’actine, au transport vésiculaire et au renouvellement régulé de complexes protéiques, contribuant ainsi au contrôle spatial de la signalisation et de la dynamique des récepteurs. Par ces fonctions, **MKLN1** peut influencer des voies régissant l’adhésion cellulaire, la migration et la protéostasie, qui sont fréquemment remaniées en biologie des cancers et dans des contextes neurobiologiques. L’expression dérégulée de MKLN1 ou les perturbations des réseaux associés à la muskéline ont été étudiées pour leurs effets sur la morphologie cellulaire, les réponses au stress et l’homéostasie de la signalisation dans des modèles pertinents pour les maladies.

Muskelin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MKLN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Muskelin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MKLN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MKLN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Muskelin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MKLN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Muskelin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Muskelin dans les cellules tumorales présentant une expression de MKLN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.