Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MUS81 Double Nickase Plasmid (h): sc-402664-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MUS81 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MUS81 Double-Nickase-Plasmid (h) und MUS81 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MUS81 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MUS81: sc-376661
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MUS81 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402664-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MUS81 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402664-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUS81 kodiert eine strukturspezifische Endonuklease, die mit EME1/EME2 ein Heterodimer bildet, um ins Stocken geratene Replikationsgabeln und Rekombinationszwischenprodukte wie Holliday‑Junction‑ähnliche Strukturen aufzulösen. Es wirkt in Signalwegen der DNA-Schadensantwort und des Replikationsstresses und koordiniert sich mit der homologen Rekombination und der Checkpoint-Signalgebung, um die Genomstabilität zu erhalten. Die MUS81-Aktivität trägt zur korrekten Chromosomensegregation bei und begrenzt während der S‑Phase die Anreicherung toxischer DNA-Zwischenprodukte. Eine fehlregulierte MUS81-abhängige Prozessierung wird in krebsassoziierten Kontexten mit erhöhter genomischer Instabilität und veränderter Empfindlichkeit gegenüber Replikationsstress in Verbindung gebracht, weshalb MUS81 ein häufiges Ziel mechanistischer Studien zur DNA-Reparatur ist.
MUS81 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MUS81-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MUS81 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MUS81-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MUS81-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.